제약회사 QC 일개미의 HPLC 적응기2

부제: 이동상 만들기와 주의할 점!

후후...
안녕하세유..케미걸입니다
드디어 본분을 다 할 때가 되었습니다..
오늘은 HPLC 돌릴 때 제일 중요하다고 생각하는!
제일 많이 실수를 범하는..ㅠㅠㅠ
이동상에 대해서 공부를 해보랴고 합니다

이동상을 흘려줌으로써 칼럼과의 결합력 차이로 크로마토그램이 완성 되는데
이동상은 꽤나 까다로운 녀석입니다

일단 개요를 보실까용?

이동상 발그림 하지만 최선을 다했다

라벨링은 꼭 해야죠!

이동상 병에 라벨을 붙여서 누가, 무엇을 만들었는지 알려야합니다.
이동상이 섞이는 것도 방지해야하고! 무색투명한 이동상 병이 라벨링도 되지 않았다면 어떻게 맞는 이동상을 찾겠어요
시험자 서명을 넣어서 책임을 부여합니다
또 사용기한을 설정하여 적어놔야 오래된 이동상을 쓰지 않게 됩니다

이동상 만들기

먼저 이동상 조제에 대해서 설명을 해드릴게요
이동상은 보통 역상 이동상을 많이 만들기 때문에
유기용매와 완충액을 일정 비율 섞어서 조제합니다.
많이 쓰는 유기용매는 아세토니트릴?! 메탄올과 에탄올도 쓰고요
완충액은 인산일수소나트륨,인산이수소나트륨,인산일수소칼륨,인산이수소칼륨,시트르산나트륨 등을 물에 녹여서
인산, 수산화나트륨 용액, 수산화칼륨 용액 등을 사용하여 pH를 맞춥니다.
인산’일’수소나트륨, 인산’이’수소나트륨
인산일수소’나트륨’, 인산일수소’칼륨’
이렇게 헷갈리는 경우가 많기 때문에.. 기록서를 꼼꼼히 읽어야합니다.

pH를 맞추지 않으면 주성분 피크의 RT(Retention time)에 영향을 줍니다!
보통 pH 5.0에 맞추라고 한다면, +- 0.05 범위 안으로 맞춰야합니다

시약은 고순도 시약을 써서 크로마토그램에 원치 않는 피크 검출의 방지 또는 Noise의 최소화를 시켜야합니다.

자, 유기용매와 완충액을 일정 비율로 섞었다면
초미세필터, 0.45um의 구멍을 가진 필터를 이용해서
감압필터링을 해줍니다. 공기방울도 제거해야하거든용

유기용매만 단독으로 사용하는 경우(Gradient mode)에도 고순도라고 해도 감압필터링을 거쳐 불순물을 제거해야합니다.

그리고 이동상은 항상 시험 직전에 조제할것!
유기용매의 비율이 높으면 공기 중에 서서히 증발되기 때문에 조성이 달라질 수 있어용

자 이제 이동상 조제를 다 했으니까
HPLC 기기에 연결해요!

필터

HPLC에 달려 있는 필터를 조심스럽게 이동상 병으로 넣어용. 넣는 과정에서 필터에 공기가 생기면 그 에어버블이 나중에 칼럼으로 들어가서 칼럼이 망가져요.
필터를 통해서 회색 라인으로 이동상이 꼴꼴꼴 들어가는거에요~
필터는 수평으로 유지하고 이동상을 충분히 만들어서 기기가 다 돌아갈 동안에 이동상이 부족해서 분석이 끊기지 않게 해야해요! 만약에 이동상을 너무 조금 만들었다면 필터가 공기를 빨아드리고... 기기는 망가지고... 조제 다시하고... 진짜 최악의 상황이 되는거에요ㅠㅠㅠㅠ

이동상이 바뀔 때마다 purge를 해야지 전체적으로 라인에 새로운 이동상이 들어가게 되는것을 꼭 기억해야합니다
-얘는 기기를 돌려봐야 알아유..


읽어주셔서 감사합니다!
다음엔 칼럼에 대해서 공부해볼게욯ㅎㅎㅎㅎ